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研究进展|非洲猪瘟病毒在运输饲料中的半衰期为9.6至14.2天,反复食用同一批饲料增大感染可能性

陕西体彩    行业动态    研究进展|非洲猪瘟病毒在运输饲料中的半衰期为9.6至14.2天,反复食用同一批饲料增大感染可能性

美国堪萨斯州立大学Ana M.M. Stoian等发表了Half-Life of African Swine Fever Virus in Shipped Feed。

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最近的研究表明ASFV Georgia 2007毒株在多种动物饲料中可稳定存在,并可在模仿跨大西洋运输的环境条件中存活。ASFV Georgia 2007的实验感染可以通过自然采食被污染的植物饲料来实现,反复食用同一批饲料后感染的可能性进一步增加。

 

 

本研究计算了30天运输条件下的9种饲料成分中病毒的半衰期。 半衰期为9.6至14.2天,表明饲料的储存环境有助于病毒稳定存在。

非洲猪瘟病毒可通过动物食用受污染的饲料传播。为了确定该病毒在跨洋运输期间的存活率,本研究计算了30天运输条件下的9种饲料成分中病毒的半衰期。半衰期为9.6至14.2天,表明饲料的储存环境有助于病毒稳定存在。

 

非洲猪瘟病毒(ASFV)是对全球猪肉生产的最大威胁。在过去一年中,该病毒已经出现在新的国家和大陆,包括比利时,并迅速在中国和亚洲其他几个国家传播。如果没有有效的疫苗或治疗,ASFV感染会导致猪的严重疾病,高死亡率,必须采取预防性措施以阻止病毒的传播。自2013年在美国引入猪流行性腹泻病毒以来,饲料和饲料成分已被认为是猪病跨界传播的潜在途径。最近的研究表明ASFV Georgia 2007毒株在多种动物饲料中可稳定存在,并可在模仿跨大西洋运输的环境条件中存活。此外,ASFV Georgia 2007的实验感染可以通过自然采食被污染的植物饲料来实现,反复食用同一批饲料后感染的可能性进一步增加。田间报告还显示受污染的饲料在中国和拉脱维亚农场引入和传播ASFV方面发挥了作用。

 

陕西体彩_陕西体彩网之前在模拟的30天跨大西洋航行期间评估了ASFV在各种饲料成分中的稳定性。陕西体彩_陕西体彩网使用这些数据来准备每种饲料成分中ASFV半衰期的粗略估计值。然而,半衰期计算基于当时获得的有限数据,包括代表接种剂量的2个时间点和研究结束时的病毒量,以及在半衰期估计值附近计算SE或95%CI的重复数据不足。在本研究中,陕西体彩_陕西体彩网的目标是通过增加同一跨大西洋模型中的时间点和重复次数来提高对ASFV半衰期估计的准确性。

 

实验

 

本研究中使用了9种饲料或饲料原料。陕西体彩_陕西体彩网设计了一个环境室,其环境条件为湿度和温度,每隔6小时波动一次,经过30天模拟的跨大西洋运输。

 

陕西体彩_陕西体彩网将5g每种γ-照射的饲料成分添加到50 mL锥形管中,然后用100 μL105 50%组织培养感染剂量(TCID50)的ASFV接种。陕西体彩_陕西体彩网使用ASFV Georgia 2007/1毒株,因为它与目前流行的分离株相似。阴性对照由膳食形式的完整饲料样品组成,加入100 μL无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)。阳性对照由5 mL RPMI 1640培养基组成,缺少饲料和100 μL105TCID50 ASFV。加入病毒或PBS后,陕西体彩_陕西体彩网将样品涡旋10秒,并用通气盖盖住每个试管进行培养。从环境室中取出样品后,陕西体彩_陕西体彩网添加了15 mL无菌PBS,并用固体盖替换了通气盖。陕西体彩_陕西体彩网将样本一式两份地组织成4个重复批次,代表4个时间点,并在2个独立的30天期间模拟跨大西洋航运模型。陕西体彩_陕西体彩网使用144滴定进行饲料中的半衰期计算(4个时间点×4个重复= 16个滴度/饲料成分)和4个时间点的重复滴度以计算RPMI培养基中的半衰期。陕西体彩_陕西体彩网在污染后的第1、8、17和30天测试了ASFV样品。在污染后1天收集第一个样品以使病毒在每个基质内稳定。

 

如前所述,通过病毒滴定定量ASFV。陕西体彩_陕西体彩网将样品涡旋10秒,然后在4℃下以10,000×g离心5分钟。将每种样品的上清液储存在-80℃。陕西体彩_陕西体彩网收集猪肺泡巨噬细胞,通过3-5周龄猪的肺灌洗进行病毒分离,并在补充有10%胎牛血清和抗生素的RPMI培养基中于37℃5%CO 2培养箱中培养1天。陕西体彩_陕西体彩网在RPMI培养基中一式三份制备2倍连续稀释液,在96孔板中向单层猪肺泡巨噬细胞中加入稀释液,并在37℃温育1小时。再次洗涤细胞并更换RPMI培养基。在37℃下4天后,将细胞用80%丙酮固定10分钟,并用小鼠抗p30单克隆抗体染色。陕西体彩_陕西体彩网将板在37℃温育1小时并用PBS洗涤3次,然后加入山羊抗小鼠Alexa Fluor 488二抗,然后在37℃下孵育1小时。陕西体彩_陕西体彩网在荧光显微镜下观察细胞,并根据Spearman-Karber方法计算log10 TCID50 / mL。

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表 *值按天数列出,否则另有说明。 饲料成分的选择基于猪饲料的使用或每年从中国进口到美国的不同成分的数量。 样品在温度(平均12.3℃)和相对湿度(平均74.1%)条件的环境室进行编程以模拟越洋运输。

†以50%组织培养感染剂量列出的重复样品的平均滴度。

 

跨大西洋模型过程中的环境条件(图A,图A)的平均+ SE温度为12.3±4.7°C(0-26°C范围),平均+ SE湿度为74.1%±19.2%(范围20)%-100%)。阴性对照样品仍为阴性。所有接种ASFV的样品均显示可检测量的感染性ASFV(图B,图B)。RPMI阳性对照的半衰期估计值短于所有测试的饲料成分:8.3 + 0.3天(95%CI 7.7-9.0天)。完全饲料中病毒半衰期最长:14.2±0.8天(95%CI,12.4-15.9天)。值得注意的是,对于常规豆粕和有机豆粕,ASFV的半衰期差异> 3天:9.6 + 0.4天(常规豆粕)和12.9 + 0.6天(有机豆粕)。饲料中的相对稳定性可能是成分中蛋白质,脂肪或水分含量不同的结果。总体而言,ASFV在所有动物饲料成分中的平均半衰期为12.2天。

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图 非洲猪瘟病毒(ASFV)Georgia 2007毒株在饲料成分中的降解,所处温度和湿度模拟30天的跨大西洋运输。

A)温度和湿度条件,在30天环境模型的过程中每6小时波动一次。环境条件基于2011年4月5日至2011年5月4日记录的历史数据的可用性,以模拟从波兰华沙到美国爱荷华州得梅因的跨大西洋运输。

B)ASFV Georgia 2007的平均TCID50在不同类型的饲料和对照的污染后1天,8天,17天和30天在猪肺泡巨噬细胞上定量。基于先前的半衰期计算和饲料中的感染剂量,用105 TCID50 ASFV接种饲料成分。

 

结论

 

尽管ASFV在受污染的猪肉产品和血液中的高稳定性已经被认可,但ASFV在植物性饲料中的稳定性在最近才得到确认。陕西体彩_陕西体彩网之前对饲料成分中ASFV半衰期的估计是基于陕西体彩_陕西体彩网现有的有限数据,包括接种剂量和在30天模型中1个时间点量化的18个滴度。在这项研究中,陕西体彩_陕西体彩网在30天模型中的几个时间点量化病毒衰减并增加样本量,这使陕西体彩_陕西体彩网能够计算半衰期估计值周围的SE和95%CI。通常,这种更新的建模方法导致所有矩阵的半衰期估计更长。

本研究提供了ASFV Georgia 2007毒株在动物饲料成分中暴露于中等温度和湿度条件下模拟跨洋运输的半衰期的定量数据。与培养基中的半衰期相比,饲料中较长的病毒半衰期支持了饲料基质提供增加ASFV稳定性的环境的概念。此外,这些数据提供了额外的证据,说明植物性饲料成分具有在受到污染时促进ASFV存活的能力。

 

陈佳宁博士翻译

周盼伊修改编辑

 

本文转自《中国动物保健》,本网站仅提供信息发布平台。文章仅代表作者个人观点,不代表lol比赛官方投注-lol投注-官网生物立场。未经作者许可,不得转载。

2019年10月10日 08:39
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